Laboratório Intermediário de Terapia Gênica e Vetores Virais (LTGVV)
Chefe do Laboratório: Hilda Petrs Silva
Programa Temático: Neurobiologia
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Apresentação:

O Laboratório Intermediário de Terapia Gênica e Vetores Virais (LTGVV) foi criado em 2021 e tem foco em terapias avançadas. Nossos projetos de pesquisa estão inseridos no contexto de neuroproteção através de terapia gênica, com emprego de vetores derivados de vírus adeno-associado recombinante (rAAV), e através de mitoterapia, isto é, transplante de mitocôndrias exógenas. Utilizamos abordagens de engenharia molecular e exploramos o potencial terapêutico da entrega de gene(s), que serve como um meio eficaz para estudar suas funções, manipular comportamentos celulares e promover o desenvolvimento de novas terapias. Utilizamos CRISPR/Cas9 como ferramenta para modular precisamente o genoma celular. Como modelos de neurodegeneração, utilizamos o glaucoma experimental. Nossas pesquisas incluem estudos da interação do vetor rAAV com o tecido retiniano; efeitos de modificações dos vetores buscando aumento da especificidade e eficácia da transdução gênica. Os objetivos dos projetos contemplam o entendimento dos mecanismos fundamentais da neurodegeneração glaucomatosa experimental e desenvolvimento de ensaios pré-clínicos de aplicação de terapia gênica ou mitoterapia neuroprotetora.

Linhas de Pesquisa:
  • Terapia gênica neuroprotetora e regenerativa para doenças neurodegenerativas.
  • Uso de ferramentas baseadas em CRISPR-Cas9 com vetores de rAAV para manipulação genética.
  • Construção de vetores de rAAV.
  • Estudos do modelo experimental de glaucoma por aumento subagudo de pressão intraocular: retina e nervo óptico.
  • Transplante de mitocôndrias em modelo experimental de glaucoma.
Principais técnicas/metodologias utilizadas:

Clonagem molecular, produção de plasmídeo de pequena, média e larga escala; produção e manipulação de vetores de rAAV; PCR em tempo real; cultura de linhagens celulares; culturas de explantes de retina; injeções intraoculares; eletrorretinograma (PERG, escotópico e fotópico); fundoscopia; tomografia de coerência óptica da retina, processamento histológico de tecidos fixados; imunohistoquímica; microscopia campo claro, de fluorescência e confocal; extração de proteínas, RNA e DNA.

Modelo/Organismo de estudo:

Ratos Lister Hooded – modelo in vitro: cultura de explantes de retinas; modelos in vivo: esmagamento do nervo óptico; aumento sub-agudo da pressão intraocular. Linhagens celulares: HEK293 (rim de embrião humano), C6 (glioblastoma) e DI-TNC1(astrócito).

Cinco publicações mais relevantes do laboratório (clicar no artigo para acessá-lo):

1. Dias MS, Luo X, Ribas VT, Petrs-Silva H, Koch JC. The Role of Axonal Transport in Glaucoma. Int J Mol Sci. 2022 Apr 1;23(7):3935. doi: 10.3390/ijms23073935. PMID: 35409291; PMCID: PMC8999615.

2. Lani-Louzada R, Marra C, Dias MS, de Araújo VG, Abreu CA, Ribas VT, Adesse D, Allodi S, Chiodo V, Hauswirth W, Petrs-Silva H, Linden R. Neuroprotective Gene Therapy by Overexpression of the Transcription Factor MAX in Rat Models of Glaucomatous Neurodegeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2022 Feb 1;63(2):5. doi: 10.1167/iovs.63.2.5. PMID: 35103748; PMCID: PMC8819487.

3. Victorino PH, Marra C, Iacobas DA, Iacobas S, Spray DC, Linden R, Adesse D, Petrs-Silva H. Retinal Genomic Fabric Remodeling after Optic Nerve Injury. Genes (Basel). 2021 Mar 11;12(3):403. doi: 10.3390/genes12030403. PMID: 33799827; PMCID: PMC7999523.

4. Nascimento-Dos-Santos G, de-Souza-Ferreira E, Lani R, Faria CC, Araújo VG, Teixeira-Pinheiro LC, Vasconcelos T, Gonçalo T, Santiago MF, Linden R, Galina A, Petrs-Silva H. Neuroprotection from optic nerve injury and modulation of oxidative metabolism by transplantation of active mitochondria to the retina. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2020 May 1;1866(5):165686. doi: 10.1016/j.bbadis.2020.165686. Epub 2020 Jan 15. PMID: 31953215.

5. Lani R, Dias MS, Abreu CA, Araújo VG, Gonçalo T, Nascimento-Dos-Santos G, Dantas AM, Allodi S, Fiorani M, Petrs-Silva H, Linden R. A subacute model of glaucoma based on limbal plexus cautery in pigmented rats. Sci Rep. 2019 Nov 8;9(1):16286. doi: 10.1038/s41598-019-52500-2. PMID: 31705136; PMCID: PMC6841973.

Equipe

Pós-Docs:

Mariana Santana Dias – UFRJ/University of Göttingen 

Alunos de Doutorado:

Victor de Araújo Guedes – Programa de Biofísica – IBCCF- UFRJ

Alunos de Mestrado:

Taliane Vasconcelos – Programa de Biofísica – IBCCF – UFRJ

Gabriela Silva de Almeida – Programa de Biofísica – IBCCF – UFRJ

Amanda Macedo Leandro – Programa de Biofísica – IBCCF – UFRJ

Alunos de Iniciação Científica:

Thiago Nobre da S. Rocha – aluno de Biotecnologia – Polo Xerém – UFRJ

Giulia F. P. Cardoso – aluna de Ciências Biológicas Modalidade Médica – UFRJ

Patrick Del Corno Leite – aluno de Medicina – UFRJ

Cecília Amaral Ferreira– aluna de Biotecnologia – Pólo Xerém -UFRJ

Thaís Gonçalo Leandro – aluna de Biotecnologia – Pólo Xerém -UFRJ

Aluno de Iniciação Tecnológica Industrial – ITI – A:

Mariana Tavares Alves – aluna de Ciências Biológicas – Biofísica -UFRJ

 

Desenvolvimento Tecnológico Industrial – DTI – A:

Caio Mota Machado – IBCCF – UFRJ

Laboratório em 1996
PRONEX 1990