Apresentação:

O Laboratório Intermediário de Terapia Gênica e Vetores Virais (LTGVV) foi criado em 2021 e tem foco em terapias avançadas. Nossos projetos de pesquisa estão inseridos no contexto de neuroproteção através de terapia gênica, com emprego de vetores derivados de vírus adeno-associado recombinante (rAAV), e através de mitoterapia, isto é, transplante de mitocôndrias exógenas. Utilizamos abordagens de engenharia molecular e exploramos o potencial terapêutico da entrega de gene(s), que serve como um meio eficaz para estudar suas funções, manipular comportamentos celulares e promover o desenvolvimento de novas terapias. Utilizamos CRISPR/Cas9 como ferramenta para modular precisamente o genoma celular. Como modelos de neurodegeneração, utilizamos o glaucoma experimental. Nossas pesquisas incluem estudos da interação do vetor rAAV com o tecido retiniano; efeitos de modificações dos vetores buscando aumento da especificidade e eficácia da transdução gênica. Os objetivos dos projetos contemplam o entendimento dos mecanismos fundamentais da neurodegeneração glaucomatosa experimental e desenvolvimento de ensaios pré-clínicos de aplicação de terapia gênica ou mitoterapia neuroprotetora.

Linhas de Pesquisa:

• Terapia gênica neuroprotetora e regenerativa para doenças neurodegenerativas.
• Uso de ferramentas baseadas em CRISPR-Cas9 com vetores de rAAV para manipulação genética.
• Construção de vetores de rAAV.
• Estudos do modelo experimental de glaucoma por aumento subagudo de pressão intraocular: retina e nervo óptico.
• Transplante de mitocôndrias em modelo experimental de glaucoma.

Principais técnicas/metodologias utilizadas:

Clonagem molecular, produção de plasmídeo de pequena, média e larga escala; produção e manipulação de vetores de rAAV; PCR em tempo real; cultura de linhagens celulares; culturas de explantes de retina; injeções intraoculares; eletrorretinograma (PERG, escotópico e fotópico); fundoscopia; tomografia de coerência óptica da retina, processamento histológico de tecidos fixados; imunohistoquímica; microscopia campo claro, de fluorescência e confocal; extração de proteínas, RNA e DNA.

Modelo/Organismo de estudo:

Ratos Lister Hooded – modelo in vitro: cultura de explantes de retinas; modelos in vivo: esmagamento do nervo óptico; aumento sub-agudo da pressão intraocular. Linhagens celulares: HEK293 (rim de embrião humano), C6 (glioblastoma) e DI-TNC1(astrócito).